上海代写香港六合资料网专业提供代写毕业香港六合资料、代写本科香港六合资料服务
联系方式
您现在的位置:首页 > 农业香港六合资料 > 畜牧兽医香港六合资料 > 鸭细小病毒病灭活疫苗的研究
鸭细小病毒病灭活疫苗的研究
发布时间:2019-03-21



兽医硕士香港六合资料范文第五篇:鸭细小病毒病灭活疫苗的研究
 

  本篇文章目录导航:

  【题目】鸭细小病毒病灭活疫苗的研制
  【1.1-1.7】鸭细小病毒病灭活疫苗研制引言
  【1.8-1.11】细小病毒病原诊断方法及预防
  【第二章】病毒疫苗的研制的材料与方法
  【第三章】新型鸭细小病毒疫苗研究结果
  【第四章-参考文献】研制鸭细小病毒病灭活疫苗作用的讨论和结论

摘 要
  
  2014年11月以来,我国部分地区所饲养的肉鸭发生了以雏鸭发育迟缓、上下喙萎缩、舌头外伸为特征的疾病。根据其发病临床特征命名为鸭短喙-侏儒综合征(duckshort beak and dwarfism syndrome,SBDS)。本实验室通过病原分离以及动物回归实验,确定了引起SBDS的病原为鸭细小病毒(Duck Parvovirus)。目前,防控该病尚无商业化的疫苗,给我国养鸭业造成了较大经济损失。鉴于此,作者选取鸭细小病毒流行株制备了鸭细小病毒病灭活疫苗,围绕新制品的研制对其实验室试验进行了一些有益的探索。
  
  将15只1日龄的樱桃谷雏鸭随机分成三组:第1组(口服组),每只口服1 m L病毒尿囊液:第2组(肌肉注射组),每只肌肉注射病毒尿囊液1 m L(EID50为10-4.5/0.2m L),第3组(对照组),每只雏鸭口服1 m L生理盐水。在感染鸭细小病毒后7、14、21 d分别对三组动物称重、测量喙长,口服组雏鸭体重极显着低于对照组,肌注组低于对照组,因此确定最佳感染途径为口服途径。
  
  为探明该病毒的生物学特性,将SD株鸭细小病毒用鸭胚传至40代,分别用10、20、30、40代病毒对动物进行攻毒实验。结果表明,F10代鸭细小病毒组雏鸭体重和喙长和对照组差异极显着,感染F20?
  
  F30代病毒组雏鸭体重和喙长与对照组对比差异显着,感染病毒F40代病毒组雏鸭和对照组差异不显着,感染后,21 d均可以检测到排毒。综上所述,该病毒传至40代,病毒对动物的致病力降低。将保存的鸭细小病毒分离株经鸭胚传代五次,收获病毒尿囊液。
  
  9000 r/min离心10  min.取上清,加双抗。将提前处理好的尿囊液和吐温-80按比例制作水相,按照油相和水相2:1比例将二者混匀,制备油乳剂灭活疫苗。并对种毒纯净性和疫苗的外观、粘度、稳定型、安全性和保存期的质量检验。为评价制备的灭活疫苗的免疫效力,将50只1日龄的雏鸭随机分为5组,每组10只,1?
  
  4组为免疫组,免疫剂量分别为100μL、250μL、500μL、1000μL,第 5组为对照组。免疫后7 d进行免疫保护实验,观察实验鸭的临床症状和排毒情况。结果表明疫苗外观为乳白色、油包水型、无外源病毒污染、粘度符合标准、稳定性良好、对动物无不良六合图库、4℃可保存1年以上;对疫苗安全性检验用20只1日龄雏鸭,随机分为两组,每组10只。一组注射成品疫苗为疫苗组,二组注射白油佐剂为对照组。疫苗组和对照组对比后精神状态正常、注射部位没有发生炎症,证明安全性检验合格;免疫保护实验中,对照组在攻毒后3d泄殖腔肛拭子检测到部分阳性,100μl?1000μL 四组免疫组检测结果全部阴性。攻毒后5 d对照组全部阳性,而1?4组免疫组检测结果全部阴性。直到攻毒21 d后,对照组检测仍然全部呈阳性,四组免疫组检测全部阴性。上述结果表明制备的鸭细小病毒灭活疫苗安全、稳定、易于储存运输,雏鸭免疫后可以获得坚强保护。
  
  本研究通过不同代次病毒接种动物,探明该病毒的生物学特性。为了有效预防本病的蔓延,用该毒株制备鸭细小病毒灭活疫苗,疫苗安全有效,能在雏鸭易感日龄提供保护,为鸭细小病毒疫苗的研制提供了依据。
  
  关键词:鸭细小病毒;鸭短喙-侏儒综合征;灭活疫苗;最小免疫剂量
鸭
Abstract
  
  Since  November  2014,  ducks  reared  in  parts  of  China  have  developed  diseasescharacterized  by  stunted  growth  of  ducklings,  atrophy  of  the  upper  and  lower  jaw,  andtongue  extension.  According  to  its  clinical  characteristics,  it  was  named  duck  short  beakand dwarf syndrome (SBDS)。 The laboratory determined that the pathogen responsible forSBDS  is  duck  parvovirus  disease  through  pathogen  isolation  and  animal  regressionexperiments. At present, there is no commercial vaccine for the prevention and control ofthe disease, which has caused great economic losses to the domestic duck industry. In viewof  this,  the  duck  duck  parvovirus  epidemic  strain  was  used  to  prepare  an  inactivatedvaccine  against  duck  parvovirus  disease,  and  some  useful  explorations  of  the  laboratoryexperiments were carried out around the development of new products.
  
  Fifteen 1 d Cherry Valley ducklings were randomly divided into three groups: Group1  (oral  group),  each  oral  1  m L  of  viral  allantoic  fluid:  Group  2  (intramuscular  injectiongroup)each only intramuscular injection of 1 m L of virus allantoic fluid (EID50 10-4.5/0.2m L)  and  group  3  (control  group)  each  duck  was  orally  administered  with  1  m L  ofphysiological saline. Groups 1 to 2 were housed in the same animal house and the controlgroup was housed in another animal house. After the duck parvovirus was infected, threegroups of animals were weighed and measured for beak length on the 7th, 14th, and 21stdays. The data showed that the weight of the ducklings in the oral group was significantlylower than that of the control group. The intramuscular injection group was lower than thecontrol group, but not significantly, it can be determined that the optimal route of infectionis the oral route.
  
  In  order  to  determine  the  biological  characteristics  of  the  virus,  the  SD  duckparvovirus spread from the duck embryo to 40 generations. Animals were challenged with10,  20,  30,  and  40  generations  of  virus,  respectively.  Data  analysis  showed  that  the  bodyweight of infected F10 virus group and control group and duck body length were extremelysignificant.  The  ducklings  infected  with  the  F20?
  
  F30  virus  group  and  the  control  grouphad  significant  differences  in  body  weight  and  body  length.  There  was  no  significantdifference between the ducklings infected with the F40 virus group and the control group.
  
  Detoxification  can  be  detected  within  21  days  after  infection.  In  conclusion,  the  virus reached  the  40th  generation  and  the  pathogenicity  of  the  virus  to  animals  was  reduced.
  
  Specific attenuated vaccines need further study.
  
  The  preserved  duck  parvovirus  isolate  was  passaged  through  the  duck  embryo  fivetimes and the virus allantoic fluid was harvested. Centrifuge at 9000 r/min for 10 min. Takethe supernatant and add double antibodies. The all processed allantoic fluid and Tween-80were prepared in proportion to the aqueous phase. The oil and aqueous phase were mixedin a ratio of 2:1 to prepare an oil emulsion inactivated vaccine. We also inspected the purityof the virus and the appearance, viscosity, stability, safety and shelf life of the vaccine. Inorder  to  evaluate  the  immune  efficacy  of  the  prepared  inactivated  vaccine,  50  1-day-oldducklings were randomly divided into 5 groups, 10 in each group, and 1 to 4 groups wereimmunized groups. The immunization doses were 100 μL, 250 μL, 500 μL, and 1000 μL,respectively.5  groups  for  the  control  group.  Immunoprotection  experiments  wereconducted  7  days  after  immunization  to  observe  the  clinical  symptoms  and  detoxificationof  the  experimental  ducks.  The  results  showed  that  the  vaccine  had  a  milky  whiteappearance, a water-in-oil type, no foreign virus contamination, a viscosity that was in linewith the standard, good stability, no adverse effects on animals, and could be stored at 4°Cfor  more  than  1  years;  20  tests  for  vaccine  safety  were  conducted  on  the  1st  Age-oldducklings  were  randomly  divided  into  two  groups,  with  10  in  each  group.  One  group  ofinjection  finished  vaccines  was  the  vaccine  group,  and  the  other  group  was  injected  withwhite  oil  adjuvant  as  the  control  group.  After  the  vaccine  group  was  compared  with  thecontrol  group,  the  mental  state  was  normal  and  no  inflammation  occurred  at  the  injectionsite,  which  proved  that  the  safety  test  passed;  in  the  immunoprotection  experiment,  thecloacae  anal  swab  detected  some  positive  in  the  challenge  group  3  d  after  the  challenge,and  100  μLto  1000  μL  of  four  groups.  All  the  immunization  results  were  negative.  Thechallenge  group  was  all  positive  after  5  days  of  challenge,  while  all  of  the  1?
  
  4  groupswere  negative.  Twenty-one  days  after  the  challenge,  the  challenge  group  still  testedpositive. All the four groups tested negative. The above results show that the prepared duckparvovirus inactivated vaccine is safe, stable, and easy to store and transport, and ducklingscan obtain strong protection after immunization.
  
  In this study, animals were vaccinated with different generations of viruses tdeterminethe  biological  characteristics  of  the  virus.In  order  to  effectively  prevent  the  spread  of  thisdisease,  duck  inactivated  vaccine  of  duck  parvovirus  was  prepared  with  the  strain,  thevaccine was safe and effective,It can provide protection for young ducklings at the age ofsusceptibility, providing a basis for the development of duck parvovirus vaccine.
  
  Keywords:Duck  parvovirus;duck  short  beak  and  dwarfism  syndrom;   Inactivatedvaccine; Minimal immunization dose



目录

  1引言
  1.1病原学
  1.1.1鹅细小病毒
  1.1.2番鸭细小病毒
  1.1.3鸭细小病毒

  1.2基因结构
  1.3蛋白及功能
  1.4病毒培养特性
  1.5理化特性
  1.6流行病学
  1.7临床症状和病理变化

  1.8病原诊断方法
  1.8.1病毒分离
  1.8.2反向间接血凝试验
  1.8.3中和试验
  1.8.4免疫组化试验
  1.8.5琼脂扩散试验
  1.8.6聚合酶链式反应
  1.8.7套式聚合酶链式反应
  1.8.8实时荧光定量PCR技术

  1.9预防
  1.9.1生物安全措施
  1.9.2疫苗防控
  1.10技术路线
  1.11研究目的和意义

  2材料与方法
  2.1材料
  2.1.1毒株
  2.1.2试验用胚、动物
  2.1.3主要试剂
  2.1.4主要溶液
  2.1.5主要仪器

  2.2方法
  2.2.1鸭细小病毒最佳感染途径的确定
  2.2.2鸭细小病毒不同代次病毒致病性六合开奖直播
  2.2.3新型鸭细小病毒疫苗研制

  3结果
  3.1鸭细小病毒最佳感染途径的确定
  3.1.1不同感染途径对雏鸭体重的六合图库
  3.1.2不同攻毒途径对雏鸭喙长的六合图库

  3.2鸭细小病毒F10~F40代病毒致病性
  3.2.1 F10~F40代病毒对雏鸭体重的六合图库
  3.2.2 F10~F40代病毒对雏鸭喙长的六合图库
  3.2.3 F10~F40代病毒接种动物排毒情况

  3.3新型鸭细小病毒疫苗检测结果
  3.3.1鸭胚病变
  3.3.2病毒的PCR检测
  3.3.3种毒的纯净性检测
  3.3.4疫苗用种毒的外源病毒检测
  3.3.5疫苗用种毒毒力的测定
  3.3.6灭活油乳剂疫苗检验

  4讨论
  5结论
  参考文献

版权所有:上海香港六合资料网专业权威的香港六合资料代写、香港六合资料发表的网站,秉承信誉至上、用户为首的服务理念,服务好每一位客户
本站部分香港六合资料收集于网络,如有不慎侵犯您的权益,请您及时致电或写信告知,我们将第一时间处理,邮箱:shlunwen@163.com